Ajuste de protocolo para a extração de DNA de feijão-caupi
DOI:
https://doi.org/10.17921/1415-6938.2025v29n2p299-311Resumo
A utilização de protocolos de extração de DNA deve propiciar a obtenção de um material genético com alta qualidade, quantidade, estabilidade e pureza. Desse modo, o objetivo deste trabalho foi ajustar o protocolo para a extração de DNA de tecido foliar de feijão-caupi (Vigna unguiculata) visando análises posteriores. Ajustes foram realizados a partir do protocolo de extração de DNA utilizando CTAB (brometo de cetiltrimetilamônio). As variáveis testadas foram CTAB (2%, 3%, 4% e 5%); B-mercaptoetanol (1% e 1,5%); Polivinilpirrolidona (2% e 3%); maceração do tecido vegetal (mecânica) nos tempos 30s, 1min e 2min, manual (com pistilo e bastão de vidro); nitrogênio líquido e incubação em banho maria (30min e 1h). Os resultados demonstram que a concentração de CTAB 5% mostrou-se mais eficiente, sendo indicada para extração de DNA da espécie. As concentrações diferentes de B-mercaptoetanol não interferiram no resultado. A maceração mecânica utilizando TissueLyser II a 1min mostrou-se eficiente para extrair DNA com boa qualidade. A utilização de nitrogênio líquido na maceração foi imprescindível para a integridade do material genético. A redução no tempo de banho-maria resultou na economia de tempo sem afetar a qualidade do DNA. O primer ISSR avaliado amplificou regiões do genoma, comprovando a eficiência da extração.
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